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    CAR-T细胞治疗技术介绍

    发布:上海乐枫生物科技有限公司
    浏览次数:563

           CAR-T(全称Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy)是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法的英文缩写。CAR-T多年前就已经出现,但是在近几年才被应用到临床上。2017年8月31日,第一个基因治疗方法CAR-T细胞药物Kymriah被美国FDA批准上市。这标志着一个全新的精准医疗时代的到来。

    T细胞是淋巴细胞的主要组分,它通过细胞免疫应答消灭特异性抗原。细胞免疫的作用主要有两种:与靶细胞特异性结合,破坏细胞膜,直接杀伤靶细胞;释放淋巴因子,使免疫效应扩大和增强。天然T细胞需要MHC分子呈递多肽与T细胞受体TCR结合才能识别病原或肿瘤,而它们有多种逃逸机制。CAR-T则是在T细胞中通过基因工程转入能够产生嵌合抗原受体(CAR)的序列,使T细胞识别更加具有特异性并且不受HLA限制,从而有效的消灭肿瘤细胞。CAR-T细胞治疗流程主要包括:

    1.    自体T细胞的分离及激活

           首先,从患者体内的外周血中分离白细胞,其他成分返回血液循环。当白细胞收集足够后,对T细胞进行富集,富集可以通过密度梯度离心法完成。T细胞亚群的分离通过CD4/CD8特异性抗体或者表面标记偶联磁珠进行分离。通过CD3及CD28等抗体刺激,活化分离的细胞。

    2.    CAR-T细胞的制备

           CAR-T细胞的制备是通过基因工程技术给T细胞加入一个能识别肿瘤细胞、同时激活T细胞、最终杀死肿瘤细胞的嵌合受体。相关基因工程技术包括慢病毒、γ逆转录病毒、睡美人转座子系统或mRNA转染、mRNA电转等。制备完成后通过细胞培养技术在体外大规模培养CAR-T细胞,使其数量达到治疗水平。

    3. 将体外培养的CAR-T细胞回输至病人体内

          CAR-T在患者体内发挥功能, CART细胞一旦发现癌细胞,不仅会杀死它,还会开始增殖,创造出庞大的灭癌大军。


     CAR-T细胞治疗技术介绍.jpg

           据报道,目前中国国内已经有数十家企业与医疗机构参与CAR-T项目研究,2018年3月12日,南京传奇生物的CAR-T制剂成为国内首个申报临床研究的获批项目。2018年9月7日,中国医药生物技术协会发布了《嵌合抗原受体修饰T细胞(CART细胞)制剂制备质量管理规范》,为方兴未艾的CAR-T细胞治疗技术提供了可靠的依据,保证CAR-T细胞制剂在临床研究和应用时的质量,让这一技术得以最好的服务于人类。

    对于CAR-T细胞治疗来说,CAR-T细胞制备是最重要的。这一步骤结合了基因工程和细胞培养技术,具有很高的技术难度。

           为了制得合适的CAR-T细胞,我们需要通过基因技术将能生产CAR的序列传导到T细胞中,通常使用最多的技术是慢病毒比如人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 慢病毒载体,可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。慢病毒可有效地感染多种类型的细胞,如神经元细胞、干细胞等。我们可以通过人工合成的CAR元件克隆至慢病毒载体,包装假病毒。再用这些假病毒感染从患者体内分离的T细胞,生产CAR-T细胞。生产出来的CAR-T细胞数量通常不能满足治疗的需要,这就需要对CAR-T细胞进行培养,使细胞数量达到使用要求。

           在这些相关的实验中,大家通?;岚炎⒁饬刈⒃谠靥?、细胞、培养基的好坏中,但是实验用水却往往会被忽视。实际上,水对于整个实验来说,起到了重要的辅助作用。在细胞培养中,超纯水用来配置和稀释液体培养基、各种缓冲液等试剂,润洗器具、容器。纯水用来清洗器具、容器,给水浴锅、灭菌器,培养箱用水(水套式)等设备提供进水。如果细胞培养用水含有杂质,会带来很大的影响:

    离子:改变渗透压

    微生物:直接污染,改变微环境(如 pH),影响增殖,死后释放内毒素等

    内毒素:改变细胞外形、活化细胞、促进或抑制细胞分裂、影响细胞附着等

    有机物:水体中溶解性和悬浮性有机物含碳的总量。间接反映出水中细菌和内毒素含量的高低。

           对于CAR-T细胞治疗来说,不但需要满足《中国药典》2015年版的相关要求,还应该满足细胞培养的特别需要。Merck  Sigma-Aldrich建议细胞培养应使用超纯水,无细菌,内毒素 < 0.005 Eu/ml,pH 5.0 - 7.0;Thermo Scicentific要求使用无细菌,内毒素<0.005 Eu/ml的超纯水。所以CAR-T细胞治疗必须使用高品质的超纯水系统。乐枫新一代 Genie G 智能型一体化超纯水系统一机两水,可以同时制备EDI 纯水和超纯水。Genie G 生产的超纯水不但符合《中国药典》2015年版的数据要求,还超过CLSI临床实验室试剂纯水CLRW的要求。取水终端采用RephiBio过滤器,确保产水无细菌,内毒素 < 0.001 Eu/ml,RNase < 0.5 pg/ml,DNase < 10 pg/ml。Genie G可储存2年的水质报告,具有可追溯性。乐枫还提供中英文的3Q验证服务,可帮助用户实验室顺利通过美国FDA或者欧盟EMA的相关认证。Genie G可以充分满足高端生命科学技术整体用水的需求,质量不输进口设备,用户使用起来,完全可以“用水无忧”。


      CAR-T细胞治疗技术介绍乐枫.jpg  

    关键词:CAR-T, 嵌合抗原受体, 慢病毒, EMA, FDA, 上海乐枫, RephiLe, Genie 纯水机, Super-Genie 纯水机

    关于上海乐枫生物科技有限公司

           上海乐枫生物专业从事高端水纯化和实验室分离纯化产品的研发、设计和制造,致力于,为生命科学和生物技术提供精锐品质、高附加值的创新产品。乐枫产品线包括实验室纯水系统、密理博纯水兼容耗材和实验室分离纯化过滤产品。成立十年,乐枫创立出了自己的品牌RephiLe(瑞枫),拥有30多项专利和多个软件著作权。产品销往全球近90个国家和地区。更多 RephiLe 产品信息,请登陆:乐枫官网www.rephile.com

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    2019-05-24 17:14:44
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